DEAE-纖維素

1 簡(jiǎn)介

   DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，保持更高載量，同時(shí)又具有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過(guò)接枝即使是純化病毒，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變。

本產(chǎn)品物理和化學(xué)穩(wěn)定性好，使用壽命長(zhǎng)，操作方便。

2 填料特征：

3 應(yīng)用的注意事項(xiàng)：

3.1 色譜柱裝填

（1）所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時(shí)裝柱即可。

（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空氣，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進(jìn)行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇，再換成5倍體積的純水，反復(fù)沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子。

（3）此填料顆粒比較細(xì)，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏，也可以取點(diǎn)填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒(méi)有問(wèn)題再將填料連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液*澄清，就可以開(kāi)泵用適當(dāng)?shù)牧魉賶褐樱盍象w積不再變化后，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。

（4）在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個(gè)小時(shí)，這樣避免裝柱子時(shí)由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。

3.2 蛋白的結(jié)合

樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致，鹽濃度過(guò)高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當(dāng)調(diào)整。

3.3 蛋白的洗脫

這個(gè)填料如果采用線性梯度洗脫，柱子的直徑和高度比是大于10，數(shù)值越大越有利于分離，而且樣品別上太多，可以按約10mg/ml上樣，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以，上樣量也沒(méi)有限制。階段洗脫容易放大，重復(fù)性好，如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據(jù)自己需要。

4 再生清洗

（1）每次用完用0.5MNaOH含2M NaCl洗 5個(gè)床體積，再用水洗5個(gè)柱床體積，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%異丙醇都含1%吐溫洗5個(gè)柱床體積，zui后20%的乙醇流洗5個(gè)柱床體積。

（2）有機(jī)溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機(jī)溶劑在室溫放置guo夜，再使用，這樣可以避免氣泡進(jìn)柱子而導(dǎo)致柱子不能正常使用。

5 保存

在20%乙醇中，4℃下長(zhǎng)期保存。